**单元 粪便检查技术
任务一 粪便采集及保存
【概述】
寄生虫学粪便检查是寄生虫病诊断的重要方法，具有非常重要的意义。因为大多数的寄生性蠕虫是寄生在消化道，它们的虫卵、节片、幼虫或者成虫会随着宿主粪便排到体外，另外，对于寄生在肝脏、胰脏的寄生虫，它们的虫卵也会进入宿主的肠道；寄生于呼吸系统的寄生虫，它们的虫卵或者幼虫会随痰液被咽入宿主的消化道。而且在禽类，还能从粪便中发现输卵管和泌尿系统寄生虫的虫卵。
【任务分析】
学会收集粪便，并对其保存以便进行虫体和虫卵的检查。
【知识点】
粪便检查是蠕虫病生前诊断的重要方法之一。因为绝大多数的寄生性蠕虫都是寄生在消化道内的，所以它们产生的卵、幼虫或节片也都是随着宿主的粪便排出体外的。粪便检查不仅对寄生在消化道的蠕虫有诊断价值，而且对寄生在肝脏、胰脏和寄生在呼吸道的蠕虫也有着重要的诊断价值，因为它们产生的卵会随着胆汁、痰液进入消化道。
粪便检查所使用的粪便应是新鲜的。因为在室温时，粪便中的虫卵会发育，并且有些蠕虫卵中的幼虫还会从卵中孵化出来。如不能即刻检查，应把待检粪便放在冷处（不超过5℃）。如需转寄至别处检查时，可浸于等量的5%～10%甲醛溶液或石炭酸中。但是，这仅能阻止大多数蠕虫卵的发育及幼虫自卵内孵出，而不能阻止少数几种蠕虫卵的发育。为了完全阻止虫卵的发育，可把浸于5%甲醛溶液中的粪便加热到50～60℃，此时，卵即丧失生命力（将粪便固定于25%的甲醛溶液中也可以取得同样的效果）。
另外，根据临床症状，怀疑家畜肠道中寄生着某种尚未达到产卵期的蠕虫时，则可选几头可疑病畜，令其服用驱除该蠕虫的药（治疗量），然后，搜集驱虫后两天内所排出的粪便，找出驱下的虫体，加以鉴定并进行计数，这就是诊断性驱虫。此外，这还可以与寄生虫学剖检技术合用，以判断某种驱虫药的治疗效果。
粪检当然不是寄生虫病诊断的唯一方法，因为还可以采用血清学和免疫学等方法来诊断寄生虫病。
【器材准备】
烧杯或青霉素小瓶（视粪便量多少）、放大镜或解剖镜、解剖针、玻璃棒或棉签、5%～10%甲醛溶液、清水。
【操作程序】
1）采用各种镜检方法之前，必须观察粪便的颜色、稠度、气味、黏液多少、有无血液、饲料消化程度，特别应仔细观察有无虫体、幼虫、绦虫的体节等。
2）先检查粪便的表面，然后轻轻拨开粪便检查。对于较小的虫体或节片，可将粪便置于较大的容器中（如烧杯），加入5～10倍水，彻底搅拌后静置10min，然后倾去上层透明液，重新加入清水搅拌静置，如此反复数次，直到上层液体透明为止。*后倾去上层透明液，将少量沉淀物放在黑色浅盘（或衬以黑色背景的培养皿）中检查，必要时可用放大镜或解剖镜检查，发现虫体后用解剖针或毛笔挑出，以便进行鉴定。
3）粪便如不能即刻检查，应把待检粪便放在冷处（不超过5℃）。如需转寄至别处检查时，可浸于等量的5%～10%甲醛溶液中。
【注意事项】
*好由直肠直接采取粪便，供粪检的粪便必须是新鲜而未被污染的。
【结果可靠性确认】
因为很多寄生于动物消化道的绦虫会不断随宿主粪便排出呈断续面条状（白色）的孕卵节片，见到这些可疑物体时，可把它们捡出来，用水洗净后观察，判明其属于什么寄生虫。检查时，用肉眼虽能将大多数的蠕虫检出，但可能会将一些小型蠕虫遗漏。因此，还应该将用肉眼检查过的粪便沉渣放于平皿内，在放大镜下观察。
任务二 粪便检查
项目一 直接涂片
【概述】
直接涂片法对粪便中虫卵进行检查*为简单易行，但检出率低。在虫卵数量不多时，每份粪便必须检查3～5片，才可收到比较好的效果。
【任务分析】
学会用直接涂片法对动物粪便进行检查。
【器材准备】
显微镜、载玻片、盖玻片、牙签或铁丝圈、滴管、5%甘油水溶液或清水。
【操作程序】
滴水（在载玻片上滴上1～2滴甘油水或清水）→取样（用牙签或铁丝圈挑取少量粪便）→与水混合→搅拌均匀→将粗的粪渣拨去→摊匀（厚薄程度以能透视下面的字体为宜）→加盖玻片镜检（重复3片以上）（图1-1）。
图1-1 直接涂片法操作程序
【注意事项】
操作直接涂片法时，所制的片子不能太干燥，否则视野不清晰；取另一个粪样时不能用同一根牙签，以免交叉污染。同样道理，在用铁丝圈取另一个粪样时，要将铁丝圈放在酒精灯上灼烧消毒。
项目二 集卵法
【概述】
集卵法是利用虫卵和粪渣中的其他成分的相对密度的差别，将较多粪便中的虫卵集聚于小范围内，易于检查，因此检出的阳性率比直接涂片法高，集卵法又分为沉淀法和漂浮法。
【任务分析】
1）学会用集卵法检查粪便中的虫卵。
2）在光学显微镜下辨别虫卵和粪便杂质。
【知识点】
沉淀法是利用虫卵密度比水大的特点，使虫卵在重力的作用下，自然沉淀于容器底部，然后进行检查。通常采用离心机进行离心，使虫卵加速沉淀在离心管底，然后镜检沉淀物，亦可采用自然沉淀过程，在大的容器内进行，每次沉淀时间为半小时以上。该法可用于相对密度较大的吸虫卵和棘头虫卵的检查。
漂浮法是应用密度大于虫卵的漂浮液，使粪便中的虫卵和粪便残渣分开浮于液体表面，以便收集进行检查的方法。本方法对大多数线虫卵、绦虫卵及球虫卵囊均有效，但对相对密度较大的吸虫卵和棘头虫卵效果较差。漂浮法通常采用饱和食盐水作为漂浮液，方法简单易行。除饱和食盐水以外，其他漂浮液也可用于一些特殊虫卵的检查，如饱和硫酸锌、饱和硫酸镁、饱和蔗糖、饱和硫代硫酸钠等溶液。常见虫卵及漂浮液的相对密度见表1-1。漂浮法可使虫卵高度密集，但除特殊需要外，采用相对密度过大的溶液是不适宜的，随溶液密度增大，粪渣浮起量增多，影响虫卵的检出，而且由于漂浮液黏度的增加，虫卵浮起速度也会相应减慢。
表1-1 常见虫卵及漂浮液密度
【器材准备】
烧杯、玻璃棒、取粪环、胶头滴管、显微镜、载玻片、盖玻片、漂浮液、离心机、离心管、粪筛或双层纱布、青霉素小瓶或试管。
【操作程序】
一、沉淀法
1）取5～10g粪便于烧杯内，加入5倍量的水，充分搅拌均匀。
2）经粪筛或双层纱布过滤到离心管内，置离心机中离心2～3min（转速为500r/min），弃上层液体。
3）离心管内加入清水，搅拌均匀，再离心。反复2～3次，直至上清液清澈为止。
4）倒去上清液，用胶头滴管吸取2滴粪汁置载玻片上，加盖玻片镜检。
步骤2）后，也可以采用自然沉淀的方法，操作过程如图1-2所示。
二、漂浮法
以临床常用饱和食盐水作为漂浮液为例。
1）配制饱和食盐水。100ml沸水中加入食盐约38g，冷却后，如有食盐晶体析出即成饱和溶液，其相对密度为1.18。
2）取少量粪便将其置于青霉素小瓶或试管内，加入10倍量饱和食盐水，搅拌均匀。
3）将满时，改用胶头滴管，加至略高于瓶口但不溢出为止。
4）取一洁净载玻片，盖在瓶口上，静置15～20min。
5）取下载玻片翻转，加上盖玻片后镜检，也可以直接用盖玻片盖在管口（图1-3）。
图1-2 自然沉淀法检查虫卵操作过程
【注意事项】
1）也可用直径5mm以内的取粪环蘸取漂浮液，或用盖玻片蘸取漂浮液后放于载玻片上镜检。
2）利用漂浮法时，漂浮时间为15～20min，时间过短（小于10min）漂浮不完全；时间过长（大于30min）易造成虫卵变形、破裂，难以识别。
3）检查时，速度要快，以防虫卵变形，必要时可在制片时加上一滴清水，以防标本干燥和盐结晶析出，影响镜检。
4）漂浮液必须饱和，且保存在不低于13℃的情况下，才能保证较高的密度，否则效果难以保证。
5）镜检时，所看的视野要有一定顺序的移动，以免漏检视野，造成诊断失误。
6）在使用饱和食盐水漂浮虫卵时，只能把大多数线虫卵、绦虫卵及球虫卵囊漂浮上来，而吸虫卵和棘头虫卵却不能浮上来，所以，在漂浮法进行完之后，可将杯中的上层液倒掉，再取沉渣镜检。
图1-3 漂浮法示意图
7）漂浮法所选容器要求口小而深，容积不可过大。取粪量视容器大小而定，漂浮液约为粪量的10倍为宜。
【结果可靠性确认】
粪便中有很多杂质易与寄生虫卵相混淆，如花粉颗粒、淀粉粒、肌肉纤维、脂肪等（图1-4），这就要求对寄生虫卵的基本特征加以掌握，识别出吸虫卵、绦虫卵、线虫卵和棘头虫卵，再根据各种虫卵的特征鉴别出具体虫种（参照**单元任务四虫卵形态学观察）。另外，可用解剖针轻轻推动盖玻片，使盖玻片上的物体转动，这样常常可以把虫卵和其他物体区分开来。易与虫卵混淆的物质及其特征见表1-2。
图1-4粪检中镜下常见杂质
A～J.植物的细胞和孢子；K．淀粉粒；L．花粉粒；M．植物线虫的一种虫卵；N．螨的卵（未发育）；O．螨的卵（已发育）
表1-2 易与虫卵混淆物质及其特征
虫卵特征：①多数虫卵轮廓清楚、光滑；②卵内有一定明确而规则的构造；③通常
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