1 绪论
1.1 多不饱和脂肪酸合成途径的研究进展
1.1.1 多不饱和脂肪酸概述
1.1.2 多不饱和脂肪酸的生物学活性
1.1.3 生物体内多不饱和脂肪酸的合成
1.2 α-亚麻酸和γ-亚麻酸的研究进展
1.2.1 α-亚麻酸的研究进展
1.2.2 γ-亚麻酸的研究进展
1.3 脂肪酸脱氢酶基因的研究进展
1.3.1 脂肪酸脱氢酶的基本概况
1.3.2 脂肪酸脱氢酶基因研究的常用方法
1.3.3 ω3-脂肪酸脱氢酶基因的研究进展
1.3.4 Δ6-脂肪酸脱氢酶基因的研究进展
1.3.5 Δ6-脂肪酸脱氢酶的结构与功能
1.3.6 Δ6-脂肪酸脱氢酶的系统进化研究进展
1.4 昆虫脂肪酸脱氢酶的研究进展
1.4.1 昆虫脂肪酸概述
1.4.2 昆虫脂肪酸脱氢酶概述
1.5 家蚕脂肪酸脱氢酶概述
1.6 研究背景、主要内容和技术路线
1.6.1 研究背景
1.6.2 研究的主要内容
1.6.3 研究的技术路线
2 家蚕BmFAD3-like和BmD6DES基因的克隆与序列分析
2.1 引言
2.2 材料与设备
2.2.1 材料
2.2.2 酶和试剂
2.2.3 引物合成和测序
2.2.4 培养基和溶液配制
2.2.5 仪器和设备
2.3 试验方法
2.3.1 家蚕总RNA和基因组DNA的提取
2.3.2 家蚕BmFAD3-like和BmD6DES基因核心片段的获取
2.3.3 重组质粒的构建与检测
2.3.4 家蚕BmFAD3-like和BmD6DES基因5'-RACE-ReadycDNA的合成
2.3.5 家蚕BmFAD3-like和BmD6DES基因5'-SMARTRACEPCR扩增
2.3.6 家蚕BmFAD3-like和BmD6DES基因3'-RACE-ReadycDNA的合成
2.3.7 家蚕BmFAD3-like和BmD6DES基因3'-SMARTRACEPCR扩增
2.3.8 家蚕BmFAD3-like和BmD6DES基因的表达模式
2.3.9 家蚕BmFAD3-like和BmD6DES基因的序列分析
2.3.10 家蚕BmFAD3-like和BmD6DES基因的进化树构建
2.4 结果与分析
2.4.1 家蚕总RNA抽提结果
2.4.2 家蚕BmFAD3-like和BmD6DESRACE扩增电泳结果
2.4.3 家蚕BmFAD3-like和BmD6DESRACE全长扩增拼接结果
2.4.4 家蚕BmFAD3-like和BmD6DES基因的序列分析
2.4.5 家蚕BmFAD3-like和BmD6DES基因的同源序列比对和进化分析
2.4.6 家蚕BmFAD3-like和BmD6DES基因表达谱分析
2.5 讨论
3 家蚕BmFAD3-like和BmD6DES基因的原核表达
3.1 引言
3.2 材料与设备
3.2.1 载体及试剂
3.2.2 仪器和设备
3.2.3 试剂配制方法
3.3 试验方法
3.3.1 家蚕BmFAD3-like和BmD6DES基因重组表达质粒的构建
3.3.2 转化细胞的诱导表达
3.3.3 电泳
3.3.4 蛋白质印迹技术检测
3.4 结果与分析
3.4.1 基因重组质粒的构建
3.4.2 家蚕BmFAD3-like和BmD6DES基因编码目的蛋白诱导及表达形式鉴定
3.4.3 家蚕BmFAD3-like和BmD6DES基因重组纯化蛋白的蛋白质印迹技术检测
3.5 讨论
4 家蚕BmFAD3-like和BmD6DES基因在酿酒酵母中的表达
4.1 引言
4.2 材料与设备
4.2.1 材料
4.2.2 菌株和质粒
4.2.3 主要试剂
4.2.4 培养基
4.2.5 仪器和设备
4.3 试验方法
4.3.1 重组表达载体的构建
4.3.2 酿酒酵母感受态细胞的制备及转化
4.3.3 酵母阳性转化子质粒提取及检测
4.3.4 酿酒酵母工程菌的筛选和诱导表达
4.3.5 重组基因表达产物样品的气相色谱分析
4.4 结果与分析
4.4.1 表达载体构建
4.4.2 阳性克隆的筛选
4.4.3 脂肪酸GC检测
4.5 讨论
5 家蚕BmFAD3-like和BmD6DES基因的表达调控
5.1 引言
5.2 材料与方法
5.2.1 材料与引物
5.2.2 仪器和设备
5.2.3 试验方法
5.3 结果与分析
5.3.1 低温诱导对家蚕BmFAD3-like和BmD6DES基因mRNA相对转录水平的影响
5.3.2 真菌侵染对家蚕BmFAD3-like和BmD6DES基因mRNA相对转录水平的影响
5.3.3 注射siRNA对家蚕BmFAD3-like和BmD6DES基因mRNA相对转录水平的影响
5.4 讨论
6 总结与展望
参考文献
展开
