第1章 绪论
1.1 鼠伤寒沙门菌的理化特性
1.1.1 沙门菌病原学
1.1.2 沙门菌的流行病学
1.1.3 沙门菌的诊断和鉴定
1.1.4 沙门菌病的防治
1.1.5 鼠伤寒沙门菌的致病机制
1.1.6 鼠伤寒沙门菌的危害
1.2 核酸酶
1.2.1 核酸酶的分类
1.2.2 核酸酶的功能
1.2.3 核酸酶在微生物感染中的作用
1.3 微生物 5'-nucleotidase
1.4 目的与意义
第2章 鼠伤寒沙门菌胞外分泌蛋白核酸酶活性的鉴定
2.1 材料
2.1.1 菌株
2.1.2 主要试剂和培养基
2.1.3 主要试剂和培养基的配制
2.1.4 主要仪器设备
2.2 方法
2.2.1 鼠伤寒沙门菌 SL1344株胞外蛋白的收集
2.2.2 琼脂糖凝胶电泳法测定胞外蛋白的核酸酶活性
2.2.3 琼脂扩散法测定胞外蛋白的核酸酶活性
2.2.4 琼脂培养法测定胞外蛋白核酸酶活性
2.2.5 温度对胞外蛋白核酸酶活性的影响
2.2.6 pH对胞外蛋白核酸酶活性的影响
2.2.7 金属阳离子对胞外蛋白核酸酶活性的影响
2.2.8 胞外蛋白活性核酸酶的 SDS-PAGE酶谱和 LC-ESI/MS/MS分析
2.3 结果
2.3.1 琼脂糖凝胶电泳法测定胞外蛋白的核酸酶活性
2.3.2 琼脂扩散法测定胞外蛋白的核酸酶活性
2.3.3 琼脂培养法测定胞外蛋白的核酸酶活性
2.3.4 温度对胞外蛋白核酸酶活性的影响
2.3.5 pH对胞外蛋白核酸酶活性的影响
2.3.6 金属离子对胞外蛋白核酸酶活性的影响
2.3.7 胞外蛋白活性核酸酶的 SDS-PAGE酶谱和 LC-ESI/MS/MS分析
2.4 讨论
2.5 小结
第3章 鼠伤寒沙门菌 5′-nucleotidase 基因的原核表达及活性分析
3.1 材料
3.1.1 菌株和质粒
3.1.2 主要试剂和培养基
3.1.3 主要试剂和培养基的配制
3.1.4 主要仪器设备
3.2 方法
3.2.1 引物合成
3.2.2 PCR产物或酶切产物的回收与纯化
3.2.3 大肠杆菌感受态的制备
3.2.4 质粒的提取与鉴定
3.2.55 '-nucleotidase目的基因的扩增
3.2.6 pMD18-T-5'-nucleotidase克隆载体的连接与转化
3.2.7 pMD18-T-5'-nucleotidase克隆载体的鉴定
3.2.8 生物信息学分析
3.2.9 重组表达载体 pET-32a-5'-nucleotidase的构建及鉴定
3.2.10 重组 5'-nucleotidase蛋白的诱导表达
3.2.11 重组 5'-nucleotidase蛋白的纯化
3.2.12 SDS-PAGE鉴定
3.2.13 Western-Blot分析 .
3.2.14 不同温度对重组 5'-nucleotidase表达的影响
3.2.15 IPTG浓度对重组 5'-nucleotidase诱导表达的影响
3.2.16 诱导时间对重组 5'-nucleotidase诱导表达的影响
3.2.17 重组 5'-nucleotidase的核酸酶活性检测
3.2.18 不同浓度对重组 5'-nucleotidase的核酸酶活性的影响
3.2.19 不同温度对重组 5'-nucleotidase的核酸酶活性的影响
3.2.20 重组 5'-nucleotidase的热稳定性检测
3.2.21 pH对重组 5'-nucleotidase的核酸酶活性的影响
3.2.22 金属阳离子对重组 5'-nucleotidase核酸酶活性的影响
3.3 结果
3.3.1 pMD18-T-5'-nucleotidase的鉴定
3.3.2同源性分析 633.3.3理化性质分析
3.3.4 结构分析
3.3.5 重组表达载体 pET-32a-5'-nucleotidase鉴定
3.3.6 SDS-PAGE鉴定及 Western-blot分析
3.3.7 不同温度对重组 5'-nucleotidase表达的影响
3.3.8 不同 IPTG浓度对重组 5'-nucleotidase表达的影响
3.3.9 不同诱导时间对重组 5'-nucleotidase诱导表达的影响 ..
3.3.10 重组 5'-nucleotidase的核酸酶活性检测
3.3.11 不同浓度的重组蛋白对其核酸酶活性的影响
3.3.12 温度对重组 5'-nucleotidase核酸酶活性的影响
3.3.13 重组 5'-nucleotidase热稳定性检测
3.3.14 pH对重组 5'-nucleotidase核酸酶活性的影响
3.3.15 离子对重组 5'-nucleotidase核酸酶活性的影响
3.4 讨论
3.5 小结
第4章 鼠伤寒沙门菌 5′-nucleotidase基因缺失菌株的构建与生物学特性
4.1 材料
4.1.1 菌株、质粒和细胞
4.1.2 主要试剂和培养基
4.1.3 主要试剂的配制
4.1.4 主要仪器设备 .
4.2 方法
4.2.1 引物的设计合成
4.2.25 '-nucleotidase基因上下臂片段的扩增
4.2.3 中间载体 pSK-Δ5'-nucleotidase的构建
4.2.4 重组自杀性质粒 pRE-Δ5'-nucleotidase的构建
4.2.5 缺失菌株 SL1344Δ5'-nucleotidase的筛选
4.2.6 沙门菌感受态的制备
4.2.7 沙门菌的电转化
4.2.8 SL1344CΔ5'-nucleotidase回复菌株的构建
4.2.9 缺失菌株 SL1344Δ5'-nucleotidase的表型鉴定及生化特性
4.2.10 缺失菌株 SL1344Δ5'-nucleotidase的遗传稳定性
4.2.11 缺失菌株 SL1344Δ5'-nucleotidase生长特性
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